◆ 非洲豬瘟ASF的由來：

    非洲豬瘟(African suwinefever,ASF)是由非洲豬瘟病毒感染家豬和野豬后產生的一種烈性傳染病。此次疫情來勢迅猛，從2018年8月首次傳入我國后便飛速席卷養(yǎng)豬業(yè)，帶來了不可預估的經濟損失。非洲瘟病毒是一種具有囊膜結構的雙鏈DNA病毒，感染家豬和野豬后引起高熱出血和死亡。目前PCR方法被指定用于非洲豬瘟病毒的檢測，其具有高靈敏度、高特異性、快速的特點。

    在此，通過實際的案例，與大家分享合作公司組合的高效靠譜的非洲豬瘟病毒檢測方案。

　◆ 非洲豬瘟感染組織樣本的前處理：

    非洲豬瘟的易感對象是家豬、野豬，通常采集的樣本為血漿和組織。對于組織樣本來說，在核酸提取前需要進行充分研磨破碎，保證核酸充分釋放，提取核酸后用于后續(xù)檢測，若無充分研磨可能會造成核酸檢測的假陰性結果。使用DHFSTPRP系列全自動樣品快速研磨機，升級了更強的動力，改進了研磨方式，樣本在全封閉狀態(tài)下裂解避免樣品間的交叉污染以及外界污染，在保證樣本安全的前提下使樣品研磨更充分、徹底，研磨效果穩(wěn)定；有多種規(guī)格適配器、研磨珠和研磨罐，可同時快速處理24-64個組織樣本，液晶顯示屏可儲存10條數據。更有DHFSTPRP-II系列液氮冷凍研磨機，真正的全自動冷凍研磨，低溫達到-196℃，可輕松處理熱敏感性樣本及難研磨樣本。

◆ 非洲豬瘟感染組織樣本核酸提取：

    TGuide S32自動核酸提取儀采用最新磁棒吸附轉移核酸純化方式，利用96深孔反應板，搭配不同種類的磁珠法核酸提取試劑，同時操作1-32個樣本，從血液、細胞、組織、病毒等多種樣本中自動分離提取純化核酸。

    儀器通過特制的磁棒高效吸附、轉移和釋放磁珠，磁珠回收效率：≥98%，核酸得率更高；液體處理體積：20-1000μl，多檔可調振動速度，溶液體積自適應振動幅度，振動幅度根據溶液體積自動調整保證裂解效果；配備交叉污染控制系統(tǒng)與紫外滅菌模塊，有效避免孔間及板間交叉污染；同時優(yōu)化加熱槽位設計，核酸回收體積更為準確。

◆ 高敏及高特異性的熒光定量PCR檢測：

    儀器通過特制的磁棒高效吸附、轉移和釋放磁珠，磁珠回收效率：≥98%，核酸得率更高；液體處理體積：20-1000μl，多檔可調振動速度，溶液體積自適應振動幅度，振動幅度根據溶液體積自動調整保證裂解效果；配備交叉污染控制系統(tǒng)與紫外滅菌模塊，有效避免孔間及板間交叉污染；同時優(yōu)化加熱槽位設計，核酸回收體積更為準確。

    終點法PCR和實時熒光定量PCR均可以檢測PCR產物的量，從而推斷初始模板的含量。由于凝膠成像方法本身靈敏度的局限，實時熒光定量PCR熒光染料的加入，使儀器對于整個PCR反應進行實時監(jiān)控，準確性更高。

    寧波中道非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒（B盒）是一款基于熒光探針的熒光定量檢測試劑盒，主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV，African Swine Fever Virus）核酸，適用于非洲豬瘟病毒的檢測、診斷和流行病學調查。

    試劑盒-20°進行保存，有限期為12個月，盒內提供陰性及陽性對照，對于整個實驗進行質量監(jiān)控。在第一批非洲豬瘟現場快速檢測試劑評價結果中，鄭州中道非洲豬瘟熒光定量PCR快速檢測試劑盒在診斷敏感性和診斷特異性上均表現優(yōu)異。

◆ 熒光定量檢測儀器：羅氏全能熒光定量PCR儀：

    羅氏Light Cycler 96熒光定量PCR儀是全波長，高光強的PCR儀，高性價比，超長使用壽命，所有樣本同時檢測且高重復性，采用業(yè)內獨有的光纖導光，避免光信號的損失；運用LightCycler 480上受好評的銀質溫控模塊，導熱性快速均一，孔間溫控差異±0.2°，升溫速度4.4°/s，降溫速度2.2°/s，96孔檢測≤40min（35 Cyclers），較許多機型可節(jié)省一半的時間。Light Cycler 96可靈敏檢測單拷貝基因，拷貝數差異≤1.5倍，置信度≥99.8%，且無需無需ROX等被動染料校正，方便快捷性能穩(wěn)定。

◆ 小體系上樣操作工具：eppendorf移液器：

小貼士：

    實時熒光定量PCR通常為小體系實驗，對于微量樣本來說特別是1-10ul上樣操作會出險移液吹打不凈現象，精準移液是準確結果的重要要素，因此推薦使用Eppendorf Reference2系列移液器搭配原裝進口吸頭進行移液操作和聯(lián)系昆騰戰(zhàn)隊工程師做移液操作專場講座，為結果的準確性保駕護航。

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